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| 2-1. |
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新鮮組織からのRNA抽出 |
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| 1. |
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組織を液体窒素の中で砕いた後、液体窒素を蒸発させる。 |
| 2. |
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100mgの組織に対して、1mlのTRIZOL試薬(Life
Technologies Inc., Rockville,MD)を加え、ピペットでよく混和する。 |
| 3. |
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18か21ゲ−ジの針と滅菌済みプラスチックシリンジを使い、サラサラとした液になるまで、何回も針を通過させて液を上下させる。 |
| 4. |
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室温に5分間放置する。 |
| 5. |
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0.2mlのクロロホルム(イソアミルアルコ−ルの入っていないもの)を加えてよく混和し、室温に3分間放置する。 |
| 6. |
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4℃で15000rpm、15分間遠心する。 |
| 7. |
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水層を新しいチュ−ブに移す。 |
| 8. |
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0.5mlのイソプロピルアルコ−ルを加えて混ぜ、室温で10分間放置する。 |
| 9. |
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4℃で15000rpm、5分間遠心する。 |
| 10. |
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上清を除く。 |
| 11. |
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70%エタノ−ル1mlを加えてよく混和し、4℃で15000rpm、5分間遠心する。 |
| 12. |
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上清を除く。 |
| 13. |
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ペレットを5分から10分間室温でふたを開けて乾燥させる(塵が入らないようにミリラップ(Millipore
Intertech, Bedford, MA))で覆う)。 |
| 14. |
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50μlか100μlのDEPC水でRNAを溶かす。 |
| 15. |
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260nmの吸光度を測定して−80℃で保存する。260nmの吸光度が1の時、RNAは40μg/mlの濃度を示す。 |
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